Жибурт Е.Б. Повышение вирусной безопасности препаратов крови// Вопр. вирусологии.- 2004.- Т.49, №4.- С.46-48
Е.Б. Жибурт
ПОВЫШЕНИЕ ВИРУСНОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ПРЕПАРАТОВ КРОВИ
Центр крови МЗ и СР РФ, Москва
Обязательный этап производства препаратов крови, приготовленных из пула нескольких сотен или тысяч образцов донорской крови - инактивация/элиминация вирусов - возможных контаминантов.
Верификация вирус-инактивации проводится путем контаминации сырья модельными вирусами.
В России контроль качества препаратов крови предписывается проводить с обязательным тестированием готовых лекарственных форм препаратов крови на отсутствие антител к ВИЧ, вирусу гепатита С, поверхностного антигена вируса гепатита с помощью тест-систем, вовсе не предназначенных для этой цели.
Таким образом, для службы крови России актуальны следующие задачи: 1) отмена требования обязательного тестирования препаратов крови на отсутствие антител к ВИЧ и вирусу гепатита С, поверхностного антигена вируса гепатита В при контроле качества препаратов крови - в силу биологической нецелесообразности этой процедуры, отсутствующей в мировой практике; 2) внедрение в практику переработки плазмы методов вирусинактивации; 3) создание специального центра по оценке эффективности применяемых производителями препаратов крови методов инактивации вирусов; 4) внедрение методов генотестирования ВИЧ, вирусов гепатитов В и С для контроля качества пулов донорских сывороток, использующихся для производства препаратов.
Ключевые слова: препараты крови, контроль качества, вирусы, безопасность, вирусинактивация, генотестирование.
Inactivation or elimination of (possibly) contaminated viruses from pool of prepared several hundreds or thousands of donor-blood samples are an obligatory stage in the donor-blood preparation process. Virus-inactivation is verified through contaminating the basic material with viruses. The quality control of blood preparations, according to the Russian compulsory regulations, must include the testing of ready blood-based drugs for a lack of antibodies to HIV, hepatitis C virus and hepatitis B virus by using the test systems, which could not de exactly designed for the above purpose. Therefore, the below tasks are vital for the Russian Blood Service: 1) cancellation of the norm (belonging to the regulations of the quality control of blood preparations) to test the blood preparations for a lack antibodies to HIV, hepatitis C virus and to the surface antigen of hepatitis B virus because it is biologically inexpedient and has no analogues in the world practice; 2) introduction of the virus-inactivation methods into the practice of plasma processing; 3) establishment of special center that would evaluate the efficiency of the virus-inactivation methods used by producers of blood-based preparations; and 4) introduction of the methods of genetic testing of HIV, hepatitis B and C viruses into monitoring the quality of donor-sera pools that are later used in preparations' manufacturing.
Инфекционная безопасность является ключевым требованием лечебного применения препаратов, приготовленных из донорской крови. Несмотря на впечатляющие достижения отбора и обследования доноров крови, повышение качества диагностических тест-систем, сохраняется риск заготовки крови от лиц с отсутствием клинико-лабораторных признаков гемотрансмиссивных инфекций, в так называемый серонегативный период "окна" [1-4]. Производимые в России препараты крови (табл. 1) получают путем выделения специфических белковых фракций плазмы крови комбинацией физических и химических методов: холодовой экстракции этанолом и(или) хроматографии. Для получения серии лечебных доз препаратов крови необходимой стадией является пулирование (объединение) нескольких сотен или тысяч образцов донорской крови. Таким образом, соответственно размерам пула повышается риск инфекционной контаминации конечного продукта [9].
Препараты плазмы производятся в заводских условиях, по правилам фармацевтической индустрии. Цель фракционирования плазмы - изоляция ее составляющих, обладающих терапевтическим потенциалом. Во избежание побочных эффектов препараты плазмы должны быть свободны от вирусов, бактериальных пирогенов, вазоактивных и тромбогенных субстанций [5].
За рубежом внедрены в практику и интенсивно развиваются технологии инактивации вирусов в плазме и продуктах ее переработки: метод "растворитель/детергент", фотодинамическая и фотохимическая инактивация в плазме, концентратах тромбоцитов и эритроцитов.
Метод "растворитель/детергент" (Solvent/Detergent, SD), лицензирован для обработки концентратов факторов свертывания в США в 1985 году. Суть метода заключается в инкубации пулов плазмы с органическим растворителем три(n-бутил)фосфатом (TNBP) и детергентом Тритон X-100. При SD - обработке разрывается оболочка вирусов, содержащая липиды, и инфекционность вирусов иммунодефицита человека, гепатитов В, С и др. утрачивается. Безопасность таких продуктов обеспечивается, с одной стороны, за счет элиминации покрытых оболочкой вирусов, а с другой - за счет сохранения в пуле вируснейтрализующих антител, в том числе к вирусу гепатита А и парвовирусу В19 - двум безоболочечным гемотрансмиссивным вирусам. В течение 13 лет использовано более 35 миллионов доз концентратов факторов свертывания и иммуноглобулинов, приготовленных с использованием SD - технологии. Случаев передачи покрытых оболочкой вирусов и токсических реакций не зарегистрировано. Дополнительные гарантии частоты продукта обеспечиваются четкой связью в производственном процессе этапов экстракции, хроматографии и фильтрации.
Для каждой технологии получения препаратов крови предусмотрена процедура подтверждения эффективности инактивации вирусов методом моделирования контаминации сырья различными вирусными агентами [10].
Например, безопасность новой технологии производства иммуноглобулина для внутривенного введения на основе хроматографии и использования каприлата для инактивации оболочечных вирусов (Bayer Healthcare, США) доказывается с использованием шести вирусов (табл.2).
Внедрение в производство высокоочищенного концентрата фактора IX в Bio Products Laboratory (Великобритания) предполагает подтверждение эффективности и безопасности этапа SD-обработки протромбинового комплекса (табл.3).
В России подтверждение инактивации вирусов в препаратах крови методом моделирования вирусной контаминации исходного сырья еще не внедрена. Существующие нормативные документы (Отраслевой стандарт ОСТ 91500.05.001.00 "Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения", утвержденный приказом Минздрава России от 1 ноября 2001 г. № 388) предусматривают включение в "Перечень разделов фармакопейных статей и фармакопейных статей на лекарственные средства" конкретных предприятий - производителей лекарственных средств по разделу "XV. Препараты крови человека" пункта "Испытание на отсутствие антигенов (антител) вирусов вирусов гепатита, иммунодефицита человека, других возможных контаминантов крови человека".
Контроль качества серий препаратов крови предписывается проводить с обязательным тестированием препаратов крови на отсутствие антител к ВИЧ, вирусу гепатита С, поверхностного антигена гепатита [7].
Традиционно серологические маркеры гемотрансмиссивных инфекций исследуются методом иммуноферментного анализа в сыворотке крови доноров. Для других целей соответствующие тест-системы не предназначены. Поиск маркеров иммунного ответа организма в готовой лекарственной форме так же не может принести значимой информации.
Приходится констатировать, что логичным развитием неверно заданной идеи поиска серологических маркеров в готовых препаратах крови становится необходимость подтверждения результатов использования тест-систем, не предназначенных для этой задачи. При этом возникает необходимость верификации серий диагностических тест-систем для каждого вида лекарственных средств [6].
Некорректность вышеуказанных регламентированных исследований обусловливает их ничтожность, ведет к напрасным трудозатратам, материальным издержкам и дискредитирует профессионализм специалистов [8].
Сохранение надуманной процедуры подменяет внедрение современных методов обеспечения инфекционной безопасности препаратов крови.
Таким образом, для службы крови России актуальны следующие задачи:
1) отмена требования обязательного тестирования препаратов крови на отсутствие антител к ВИЧ и вирусу гепатита С, поверхностного антигена вируса гепатита В при контроле качества препаратов крови - в силу биологической нецелесообразности этой процедуры, отсутствующей в мировой практике; 2) внедрение в практику переработки плазмы методов инактивации вирусов; 3) создание специального центра по оценке эффективности применяемых производителями препаратов крови методов инактивации вирусов; 4) внедрение методов генотестирования ВИЧ, вирусов гепатитов В и С для контроля качества пулов донорских сывороток, использующихся для производства препаратов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Жибурт Е.Б., Бельгесов Н.В., Ващенко Т.Н. и др. Аланинаминотрансфераза - суррогатный маркер вирусного гепатита// Вопр. вирусологии.- 1995.- Т.40, №1.- С.25-27
2. Жибурт Е.Б., Серебряная Н.Б., Ионова А.И. и др. Метод диагностики инфекции вирусом Эпштейна-Барр// Вопр. вирусологии.- 1996.- Т.41, №4.- С.185-187
3. Жибурт Е.Б., Бельгесов Н.В., Данильченко В.В. и др. Сравнительная характеристика тест-систем для определения антител к вирусу гепатита С// Вопр. вирусологии.- 1996.- Т.41, №2.- С.61-63
4. Жибурт Е.Б., Данильченко В.В., Бельгесов Н.В. и др. К совершенствованию определения антител к вирусу гепатита С у доноров гемокомпонентов// Вопр. вирусологии.- 1997.- Т.42, №6.- С.283-284
5. Жибурт Е.Б. Трансфузиология: учебник.- СПб: Питер, 2002.- 736 с.
6. Карякин А.В., Иванова Н.Е. Валидация ИФА тест-систем для контроля вирусной безопасности препаратов и компонентов крови// Актуальные проблемы гематологии и трансфузиологии.- Минск: "Стринко", 2003.- Т.1.- С.352
7. Письмо Департамента государственного контроля лекарственных средств и медицинской техники Минздрава РФ от 14 марта 2002 г. N 296-22/34
8. Русанов В.М. Еще раз о состоянии производства препаратов донорской крови в России, методологической и юридической основе его деятельности// Вестник службы крови России.- 2003.- №2.- С.9-14
9. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б. Безопасное переливание крови.- СПб.: Издательство "Питер", 2000.- 320 с.
10. Committee for Proprietary Medicinal Products, European Medicines Evaluation Agency: Note for Guidance on Plasma-Derived Medicinal Products. CPMP/BWP/269/95 Rev 3. European Agency for the Evaluation of Medicinal Products, 2001
11. Roberts P.L., Dunkerley C. Effect of manufacturing process parameters on virus inactivation by solvent-detergent treatment in a high-purity factor IX concentrate// Vox Sanguinis.- 2003.- Vol.84, №3.- P.170-175
12. Trejo S.R., Hotta J.A., Lebing W. et al. Evaluation of virus and prion reduction in a new intravenous immunoglobulin manufacturing process// Vox Sanguinis.- 2003.- Vol.84, №3.- P.176-187
Таблица 1. Основные препараты плазмы крови
Препарат
Показание
Альбумин 5 %
Восстановление объема циркулирующей плазмы
Альбумин 20 %
Гипоальбуминенемия, отеки
Протеин
Восстановление объема циркулирующей плазмы
Фактор VIII
Гемофилия А, болезнь Виллебранда
Протромбиновый комплекс
Гемофилия В, кровотечение при передозировке кумаринов и болезнях печени
Фактор IX
Гемофилия В
Фактор XI
Врожденный дефицит
Фактор XIII
Врожденный дефицит
Фибриноген
Врожденный дефицит, ДВС при низком уровне фибриногена
Протеин С
Врожденный дефицит
Антитромбин III
Врожденный дефицит
Нормальный иммуноглобулин
Первичный и вторичный дефицит антител; некоторые аутоиммунные/воспалительные заболевания
Гипериммунный иммуноглобулин
Пассивная профилактика
С1 ингибитор
Наследственный ангионевротический отек
Альфа1 - антитрипсин
Врожденный дефицит
Холинэстераза
Врожденный дефицит
Фибринолизин
Растворение внутрисосудистых свертков
Гаптоглобин
Поддерживающая терапия при вирусном гепатите и пернициозной анемии
Таблица 2. Характеристики вирусов использующихся для валидации вирус-инактивации иммуноглобулина для внутривенного введения [12]
