ГЕНОТЕСТИРОВАНИЕ: НЕОБХОДИМОСТЬ И РЕАЛЬНОСТЬ

Этот метод позволяет выявить многие инфекции гораздо быстрее

Молекулярные технологии все активнее внедряются в практику профилактической и клинической медицины. Трансфузиология, будучи изначально биотехнологической отраслью здравоохранения, внедряет методы геномики наиболее широко. Координационный совет служб крови государств-участников СНГ, Российская ассоциация трансфузиологов и Центр крови Минздравсоцразвития России провели ежегодный семинар "Амплификационное тестирование нуклеиновых кислот (NAT) в клинической лаборатории" для специалистов России и стран СНГ.

Обзору мировой практики генотестирования в трансфузиологии и возможностям отечественной службы крови был посвящен доклад директора Центр крови Минздравсоцразвития России профессора Евгения Жибурта. Практически во всех странах Западной Европы США, Канаде, Японии, Австралии и др. является обязательным обследование крови каждого донора на нуклеиновые кислоты гемотрансмиссивных инфекций (ВИЧ, вирусные гепатиты В и С). Кроме того, пул образцов плазмы, создающийся для фракционирования белков (альбумин, иммуноглобулины, факторы свертывания) тестируется на эти инфекции и на маркеры парвовируса В19 и гепатита А. Разработка генодиагностикума - оптимальный ответ на "вновь возникающие" инфекции. Так, при выявлении опасности передачи вируса Западного Нила с переливанием крови в США в течение нескольких месяцев было внедрено обязательное ПЦР-тестирование донорской крови на этот патоген.

Основным направлением генодиагностики в мировой клинической медицине является именно служба крови, в которой необходимо одномоментное массовое обследование крови клинически здоровых людей и, соответственно, на этапе скрининга возможно пулирование с последующей верификацией положительных пулов. При этом в каждом исследовании необходим количественный контроль чувствительности метода по стандартному образцу.

Тормоз прогресса в отечественной службе крови - несоответствие, раздробленного множества станций и отделений, производящих компоненты крови, лабораторий, исследующих донорскую кровь, возрастающей сложности (и стоимости) трансфузиологических технологий. По сравнению с традиционным иммуноферментным анализом метод генодиагностики позволяет выявить ВИЧ-инфекцию ранее - на 9 дней, вирусный гепатит С - на 31 день, вирусный гепатит В - на 24 дня. ПЦР-диагностика требует высокой лабораторной культуры с тем, чтобы исключить молекулярную контаминацию и ложноположительные результаты исследования.

Европейская фармакопея предписывает контролировать плазму-сырье для производства препаратов крови на РНК вируса гепатита С с чувствительностью не менее 5000 МЕ/мл в расчете на дозу плазмы одного донора. Для выделения белков пулируется несколько тысяч доз плазмы различных доноров. Соответственно, в тысячи раз по сравнению с единичной трансфузией возрастает риск контаминации реципиентов препаратов - иммуноглобулинов и факторов свертывания. К сожалению, в России для контроля качества готовых лекарственных форм альбумина и иммуноглобулинов используют те же иммуноферментные тест-системы, что и для обследования доноров, что создает лишь видимость обеспечения вирусной безопасности препаратов. Таким образом, первым направлением внедрения ПЦР в отечественную службу крови должен стать контроль сырья на заводах, производящих белковые препараты крови.

Второе направление внедрения генодиагностики в службу крови России - инициативное создание генодиагностических лабораторий в ведущих центрах крови, заботящихся о безопасности гемотрансфузий свои реципиентам. В Бразилии, например, где также пока ПЦР-обследование доноров не является обязательным, крупные центры крови создают региональные лаборатории скрининга нуклеиновых кислот патогенов. В Сан-Паулу в 2004 году впервые выявлен донор с содержанием РНК ВИЧ 24100 копий/мл и с отрицательным результатом скрининга антигена р24 и антител к ВИЧ (антиген появился через 5, а антитела - через 10 дней после донации).

Такие доноры встречаются не часто - один на несколько сотен тысяч человек (в генодиагностической лаборатории Центра крови исследовано более 160 тысяч образцов, но ИФА-отрицательных ПЦР-положительных доноров не обнаружено). Однако поскольку каждый случай ятрогенной инфекции - трагедия, то дополнительные меры профилактики, при наличии соответствующих возможностей, представляются обоснованными.

Доктор биологических наук Андрей Ёлов продемонстрировал методику экстракции ДНК и РНК и методы качественной и количественной флуоресцентно-гибридизационной детекции продукта генной амплификации. Контроль этих стадий может быть осуществлен только на основе стандартов, вводимых в биологические пробы. Эффективность генной амплификации зависит от самого материала, содержащего различные ингибиторы, метода экстракции нуклеиновых кислот, температурного режима ПЦР, которые различны в разное время и в разных лабораториях, и поэтому лимит детекции патогена может различаться в десятки раз. В связи с этим единственным и объективным критерием оценки каждой NAT-тест-системы является результат, полученный при тестировании внешнего стандарта с известной концентрацией в геном/эквивалентах на 1 мл., желательно калиброванным по международному стандарту.

Возможность для широкого внедрения генамплификационных технологий в клиническую лабораторную диагностику дает метод ПЦР в реальном времени. С появлением подобных приборов весь процесс NAT-диагностики может быть размещен на одном столе без риска получения ложноположительных результатов.

Перспективам применения биологических микрочипов в медицине была посвящена лекция кандидата биологических наук Дмитрия Грядунова из Центра биочипов НИИ молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, имеющего международное признание в деле разработки оригинальных технологий и внедрения их в медицинскую практику. Благодаря биочиповой технологии имеется реальная возможность все иммуносерологические и иммуноферментные, биохимические и бактериологические исследования донорской крови проводить не в отдельных лабораториях на специальной аппаратуре в течение 1-2 суток, а осуществлять их на 2 биочипах за 2 часа на все маркеры без подтверждающих анализов. Возможно, в будущем вместо шести разнородных лабораторий Центра крови со специальной аппаратурой и соответствующими специалистами будет одна биочип-лаборатория с одним скринирующим и регистрирующим устройством.

В дискуссиях и практических занятиях на семинаре была отмечена необходимость усиления внимания к достижениям геномики. В России сегодня зарегистрированы не только лучшие мировые приборы для ПЦР в реальном времени, но и созданы отечественные аналоги. Настала пора шире внедрять генодиагностические технологии в практику службы крови России.

Николай ФЕДОРОВ
руководитель генодиагностической
лаборатории Центра крови
Минздравсоцразвития России,
профессор.